(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 20221080979 9.3 (22)申请日 2022.07.11 (71)申请人 中山大学附属第五医院 地址 519000 广东省珠海市香洲区梅 华东 路52号 (72)发明人 何欢欢　聂惠龙　佘晓露　张舒珊　 谢冰帆　 (74)专利代理 机构 广州正明知识产权代理事务 所(普通合伙) 44572 专利代理师 张丽 (51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01) G01N 33/574(2006.01) G01N 33/68(2006.01) A61K 45/00(2006.01)A61P 35/00(2006.01) A61P 35/04(2006.01) (54)发明名称 基于高表达PLIN2的巨噬细胞亚群对卵巢癌 腹水诊断和治 疗的应用 (57)摘要 本发明属于妇科疾病治疗技术领域， 公开了 高表达PLIN2的巨噬细胞亚群对卵巢癌腹水诊断 和治疗的应用。 通过对卵巢癌患者的原发肿瘤、 转移病灶和腹水中的CD45+免疫细胞进行单细胞 RNA测序， 发现了一个新的在腹水中富集的巨噬 细胞亚群， 并与卵巢癌进展呈正相关， 被命名为 腹水相关巨噬细胞(AAM)。 AAM呈M2表型， 伴促肿 瘤通路上调和脂滴蛋白PLIN2的高表达。 敲低巨 噬细胞PLIN2降低了体外内皮细胞的通透性和肿 瘤细胞的迁移， 抑制了体内腹水的产生和癌症的 转移。 AAM与原发和转移病灶中的肿瘤相关巨噬 细胞相似， 但细胞粘附途径下调， 同时增强与 CD4+T淋巴细胞的相互作用而呈现免疫抑制表 型， 为治疗卵巢癌提供了一个潜在的免疫治疗靶 点。 权利要求书1页 说明书11页 附图14页 CN 115198017 A 2022.10.18 CN 115198017 A 1.腹水相关巨噬细胞亚群mac_c4_PL IN2在开发、 筛 选卵巢癌功能产品中的应用。 2.根据权利 要求1所述的应用， 其特征在于， 所述腹水相关巨噬细胞亚群mac_c4_PLIN2 具有M2表型， 且与卵巢癌腹水的产生和转移呈正相关。 3.对PLIN2基因或其表达产物具有抑制作用的功能产品在制备预防或/和治疗卵巢癌 的产品方面的应用。 4.PLIN2基因或其表达产物在开发、 筛选卵巢癌功能产品方面的应用， 所述功能产品对 PLIN2基因或其表达产物具有抑制作用。 5.根据权利要求3或4所述的应用， 其特征在于， 所述功能产品用于减少卵巢癌腹水的 产生和/或转移。 6.根据权利要求5所述的应用， 其特征在于， 所述功能产品包括： PLIN2核酸抑制剂、 PLIN2蛋白抑制剂、 PLIN2基因缺陷或者沉默 的免疫相关细胞、 其分化细胞或者基因重组构 建体中的一种或者多种。 7.根据权利要求6所述的应用， 其特 征在于， 所述功能产品包括以下任一种： (i)以PLIN2， 或PLIN2转录本为靶序列， 且能够抑制PLIN2基因表达产物的表达或基因 转录的小干扰RNA、 dsRNA、 shRNA、 微小RNA、 反义核酸； (ii)能表达或者形成(i)中所述小干扰RNA、 dsRNA、 shRNA、 微小RNA、 反义核酸构建体； (iii)含有PLIN2， 或PLIN2互补序列且能够在转入体内后形成抑制PLIN2基因表达产物 的表达或者基因转录的干扰分子的构建体； (iv)抑制或敲除PL IN2基因序列后的免疫相关细胞、 其分化细胞或构建体。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115198017 A 2基于高表达PLIN2的巨噬细胞亚群对 卵巢癌腹水 诊断和治疗 的应用 技术领域 [0001]本发明涉及妇科疾病治疗技术领域， 更具体地， 涉及高表达P LIN2的巨噬细胞亚群 对卵巢癌腹水诊断和治疗的应用。 背景技术 [0002]卵巢癌(OC)是最致命的妇科恶性肿瘤， 高级别浆液性卵巢癌(HGSOC)是最普遍和 最具侵袭性的亚型。 HGSOC患者常诊断为晚期， 其中1/3在 诊断时出现腹水。 恶性腹水不仅影 响生活质量， 而且还导致高死亡率， 从而成为OC的不利预后 指标。 无数的研究试图揭示腹水 发生发展的机制， 最常见的罪魁祸首是毛细血管通透性增加和腹膜淋巴引流受损。 然而， 恶 性腹水的发病机制比目前所揭示的要复杂得多。 此外， 腹水被认为是经腹腔转移不可或缺 的介质， 即使在 疾病的早期阶段， 肿瘤细胞也会脱落和扩散， 最 终导致复发和不良的临床结 果。 然而， 腹水如何介导经腹腔播散仍然未知， 使目前的治疗无效。 [0003]靶向肿瘤微环境(TME)的免疫疗法在各种癌 症类型中显示出较好的结果。 然而， 由 于TME的复杂性和异质性， 只有少数患者对这种治疗有反应。 由细胞和无细胞成分组成的OC 恶性腹水中的TME与实体瘤中的TME完全不同。 巨噬细胞是TME中一种主要的免疫细胞类型， 占腹水TME的40 ‑95％。 尽管肿瘤相关巨噬细胞(TAM)可以促进肿瘤生长， 转移， 免疫抑制， 血 管生成和耐药， 但恶性腹水的巨噬细胞的异质性和功能尚未 得到充分表征。 [0004]单细胞RNA测序(scRNA ‑seq)已成为一种通过揭示新型免疫细胞亚群和细胞间相 互作用来剖析TME等复杂系统异质性的有效方法。 许多癌症类型 的免疫微环境图谱已经在 单细胞水平上被破译， 包括肝细胞癌， 乳 腺癌， 肺腺癌甚至泛癌。 例如， 在OC中， scRNA ‑seq鉴 定出16个不同的细胞群， 与高级别， 低级别， 良性和乳 腺癌复发患者相关的特有的一个群体 相关。 OC TME中的细胞间相互作用揭示了细胞相互作用塑造不同肿瘤免疫表型的潜在机 制。 最近， 针对OC腹水的scRNA ‑seq研究描述了腹水中恶性细胞的变异和免疫细胞的组成。 然而， 腹水中的巨噬细胞的表型多样性和致病功能有 待进一步验证。 发明内容 [0005]为了克服现有技术存在的上述问题， 本发明首先提供了腹水相关巨噬细胞亚群 mac_c4_PL IN2的应用。 [0006]本发明的第二个目的是提供P LIN2基因或其表达产物在制备卵巢癌功能产品方面 的应用。 [0007]本发明的目的通过以下技 术方案实现： [0008]腹水相关巨噬细胞亚群mac_c4_PL IN2在开发、 筛 选卵巢癌功能产品中的应用。 [0009]本发明采用scRNA ‑seq， 解析了来自OC患者的三个不同部位(原发灶， 转移灶和腹 水)的免疫微环境组成， 突出了腹水中巨噬细胞的一个新亚群mac_c4_PLIN2(文中简称 AAM)， AAM特征是脂肪分化相关蛋白(PLIN2)的高表达， 并且敲低巨噬细胞中PLIN2降低了内说　明　书 1/11 页 3 CN 115198017 A 3