(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211240159.1 (22)申请日 2022.10.11 (71)申请人 广西中医药大学赛恩斯 新医药学院 地址 530222 广西壮 族自治区南宁市青秀 区五合大道13号 (72)发明人 龚志强　韩沙　李成林　柳贤福　 黄敏　 (74)专利代理 机构 南宁市来 来专利代理事务所 (普通合伙) 45118 专利代理师 来光业 (51)Int.Cl. C07C 69/587(2006.01) C07C 67/48(2006.01) C07C 67/56(2006.01) A61P 31/04(2006.01)A61P 31/06(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 白鹤灵芝萘醌类单体白鹤灵芝素-C的制备 方法及应用 (57)摘要 本发明公开了一种白鹤灵芝萘醌类单体白 鹤灵芝素 ‑C的制备方法及应用， 具体为： 取白鹤 灵芝药材粉碎， 加乙酸乙酯加热回流， 提取液减 压回收溶剂， 加入硅胶拌样， 干燥， 300目硅胶装 柱， 用正己烷 ‑乙酸乙酯梯度洗脱， 收集10:1流 分， 减压浓缩， 得总萘醌， 总萘醌用甲醇溶解， 与 强碱性苯乙烯系阴离子交换树脂搅拌， 静置反 应， 将吸附样品的离子交换树脂倒入玻璃柱， 先 用甲醇洗脱， 然后用10%醋酸甲醇洗脱， 收集10% 醋酸甲醇洗脱液， 减压回收溶剂， 即得高纯度白 鹤灵芝素 ‑C。 该方法简单易行， 收率高， 制得的白 鹤灵芝素 ‑C产品纯度不低于95%。 且本发明通过 研究发现， 白鹤灵芝素 ‑C对HepG2、 HeLa细胞的 IC50分别为49.19μmol/L、 35.21μmol/L； 对金 黄色葡萄球 菌和结核杆菌均有较好的抑制作用。 权利要求书1页 说明书5页 附图7页 CN 115385795 A 2022.11.25 CN 115385795 A 1.一种白鹤灵芝萘醌类单体白鹤灵芝素 ‑C的制备方法， 其特 征在于， 包括如下步骤： （1） 称取白鹤灵芝药材全草粉碎， 加6～10倍量的乙酸乙酯加热回流3～4次， 每次1小 时， 提取液减压回收溶剂， 反相 柱色谱分离， 加入1～1.6倍量硅胶200目拌样， 干燥； 10～15 倍量300目硅胶装柱， 用正己烷： 乙酸乙酯为洗脱 溶剂进行梯度洗脱， 收集 10:1流分， 流分减 压浓缩得白鹤灵芝萘醌类富 集物即总萘醌； （2） 总萘醌用甲醇溶解， 与强碱性苯乙烯系阴离子交换树脂搅拌， 静置反应1～2  h， 将 吸附样品的离子交换树脂倒入玻璃柱， 先用2～4  柱体积的甲醇洗脱， 然后用2～4  柱体积 的10%醋酸甲醇洗脱， 收集10%醋酸甲醇洗脱液， 减压回收溶剂， 即得高纯度白鹤灵芝素 ‑C。 2.根据权利要求1所述的白鹤灵芝萘醌类单体白鹤灵芝素 ‑C的制备方法， 其特征在于， 步骤 （1） 中采用正己烷： 乙酸乙酯为洗脱 溶剂进行梯度洗脱 是按照正己烷： 乙酸乙酯 体积比 20:1→1:1进行梯度洗脱， 收集 流分为10:1流分。 3.根据权利要求1所述的白鹤灵芝萘醌类单体白鹤灵芝素 ‑C的制备方法， 其特征在于， 所述步骤 （2） 是通过强碱性苯乙烯系阴离子交换树脂对白鹤灵芝素萘醌类富集物即总萘醌 中的白鹤灵芝素C进行分离 。 4.根据权利要求1所述的白鹤灵芝萘醌类单体白鹤灵芝素 ‑C的制备方法， 其特征在于， 制备得到的白鹤灵芝素 ‑C产品的纯度不低于95%。 5.根据权利要求1所述的白鹤灵芝萘醌类单体白鹤灵芝素 ‑C的制备方法， 其特征在于， 白鹤灵芝素 ‑C在制备抗人肝癌HepG2细胞和/或人宫颈癌HeLa细胞 药物中的应用。 6.根据权利要求1所述的白鹤灵芝萘醌类单体白鹤灵芝素 ‑C的制备方法， 其特征在于， 白鹤灵芝素 ‑C在制备金黄色葡萄球菌抑制剂和/或结核杆菌抑制剂中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115385795 A 2白鹤灵芝萘醌类单 体白鹤灵芝素 ‑C的制备方 法及应用 技术领域 [0001]本发明涉及一种白鹤灵芝萘醌类单体白鹤灵芝素 ‑C的制备方法及应用， 具体涉及 一种采用反相柱色谱从壮药白鹤灵芝药材中富集白鹤灵芝总萘醌， 再经由强碱性苯乙烯系 阴离子交换树脂制备高纯度白鹤灵芝素 ‑C的方法及应用， 属于天然药物化学技 术领域。 背景技术 [0002]白鹤灵芝为爵床科白鹤灵芝属植物 Rhinacanthus  nasutus (L.)Kurz的干燥枝、 叶， 别名癣草， 主产于云、 桂、 贵等地深山， 是壮族等少数民族秘传的珍贵药材， 壮药名Go ’ gyak （棵绛） ， 清热毒、 杀虫、 止痒； 主治能晗能累 （湿疹） 、 痂 （疥癣） 、 额哈 （毒蛇咬伤） 等， 具有 清热疏肝、 杀虫止痒、 收敛止血等功效。 白鹤灵芝叶披针形对生生长， 叶片呈黄 绿色， 花冠颜 色为白色， 像嘴唇类型， 花冠可以长在枝顶、 叶腋这两个部位， 放眼望去犹如白鹤成群结对 的在一望无垠的天空中翱翔， 且药效有如灵芝， 故中药界人士命名为 “白鹤灵芝 ”， 植物形态 见附图1。 [0003]药理活性报道白鹤灵芝具有抗病毒、 抗肿瘤、 抑菌、 降血脂、 抗凝血等多种作用。 白 鹤灵芝含有多种化学成分， 主要含有20余种类胡桃醌酯类衍生物的萘醌以及黄酮、 异黄酮、 香豆素、 挥发油等 （白鹤灵芝萘醌类化合物结构式见附图2） 。 萘醌类化合物是从白鹤灵芝醇 提物中分离得到的主要活性成分， 化学结构以胡桃醌酯 类衍生物及其甲氧基衍生物为主醌 类化合物具有广泛的药 理活性， 包括抗炎、 抑菌、 抗病毒、 抗肿瘤等活性， 其中较为显著的是 萘醌类化合物的抗肿瘤活性。 目前， 已从白鹤灵芝中分离鉴定出包括rhinacanthin ‑A～V及 rhinacanthone共2 0个萘醌类化合物， 其中主要 为α‑（1， 4） 萘醌19 个， 和β‑（1， 2） 萘醌1个， 其 中白鹤灵芝素 ‑C为主要报道的活性物质。 [0004]白鹤灵芝素 ‑C可通过抑制前列腺素E2  和肿瘤坏死因子而治疗风湿性关节炎， 还 可以抑制NO  和PGE2 释放抑制炎症的发生。 白鹤灵芝素 ‑C对人宫颈癌细胞系HeLa  及其 MDR1 过表达亚系Hvr100 ‑GFP 在体外评估显示较好的抗细胞增殖活性。 白鹤灵芝素 ‑C，‑ D，‑N对抗原诱导的TNF ‑α 和IL‑4 释放的活性筛选， 结果显示白鹤灵芝素 ‑C可很好的用于 治疗过敏及过敏相关疾病。 白鹤灵芝素 ‑C还可诱导HMGB ‑1 重组蛋白损害RCT ‑C 的神经保 护和免疫抑制作用， 减轻SAH  发病机制中的脑细胞凋亡， 并通过干扰MRP2  和P‑gp功能来增 强阿霉素的细胞毒性。 白鹤灵芝素 ‑C对调节脂多糖淀粉样β  肽或干扰素γ  诱发的神经元 和神经胶质细胞也具有保护作用。 另有研究表明白鹤灵芝素 ‑C 可有效清除超氧化物和抑 制白蛋白糖化使其在各种慢性疾病， 尤其是糖尿病并发症中的治疗作用合理化。 [0005]目前对白鹤灵芝的研究主要集中在规范化种植 （GAP） 、 质量控制技术方面， 药理活 性主要集中在降血脂、 降血糖及对非酒精性脂肪肝的保护作用。 对白鹤灵芝的有效活性成 分和指标性成分方面的研究比较欠缺， 在白鹤灵芝素 ‑C的制备方法方面的研究也较少。 检 索到相关的文 献如申请号为201110304675.1的中国专利， 公开了一种高纯度白鹤灵芝素  C  的制备方法， 但是本申请人经过研究发现按照该专利申请中所述的制备方法进行制备白鹤 灵芝素 C并不能得出其所描述的纯度不低于  95%这样的产品纯度， 而且该公开的技术方案说　明　书 1/5 页 3 CN 115385795 A 3